Mlolongo wa genomic wa virusi vingi umejulikana.Vichunguzi vya asidi ya nyuklia ambavyo ni sehemu fupi za DNA iliyoundwa kuchanganywa na DNA ya virusi au sehemu za RNA .Mmenyuko wa mnyororo wa polimerasi (PCR) ni mbinu bora zaidi ya kugundua virusi.Mbinu za uchunguzi wa juu zimetengenezwa hivi karibuni.
A. Mbinu ya mseto ya asidi Nucleic
Uchanganyaji wa asidi ya nyuklia, haswa ikijumuisha ufutaji wa Kusini (Kusini) na ukaushaji wa Kaskazini (Kaskazini), ni mbinu mpya inayokua haraka katika uwanja wa uchunguzi wa virusi.Mantiki ya jaribio la mseto ni kutumia sehemu fupi za DNA (zinazoitwa "probe") iliyoundwa ili kuchanganya na DNA ya virusi au sehemu za RNA.Kwa kupasha joto au matibabu ya alkali, DNA au RNA inayolengwa yenye nyuzi mbili hutenganishwa katika nyuzi moja na kisha kuzuiwa kwa usaidizi thabiti.Baada ya hapo, uchunguzi huongezwa na kuchanganywa na DNA au RNA inayolengwa.Kwa vile uchunguzi umewekwa alama ya isotopu au nuklidi isiyo na mionzi, DNA au RNA inayolengwa inaweza kutambuliwa kupitia otoradiography au kwa mfumo wa biotin-avidin .Kwa kuwa jenomu nyingi za virusi zimeundwa na kupangwa, zinaweza kutambuliwa kwa kutumia mfuatano maalum wa virusi kama uchunguzi kwenye sampuli.Hivi sasa, mbinu za mseto ni pamoja na: dot blot , mseto wa in situ katika seli , DNA blotting(DNA) (Southern blotting) na RNA blotting(RNA) (Northern blot).
Teknolojia ya B.PCR
Katika miaka ya hivi karibuni, mfululizo wa mbinu za ukuzaji wa asidi ya nukleiki ndani ya vitro umetengenezwa kulingana na PCR, ili kupima virusi visivyo na hisia au zisizoweza kupandwa.PCR ni njia ambayo inaweza kujumuisha mfuatano mahususi wa DNA kwa mmenyuko wa polimerasi ya in vitro.Mchakato wa PCR ni pamoja na mzunguko wa joto wa hatua tatu: denaturation, annealing, na ugani Katika joto la juu (93℃~95℃), DNA yenye nyuzi mbili hutenganishwa katika nyuzi mbili za DNA;kisha kwa halijoto ya chini (37℃~60℃), vianzio viwili vya nyukleotidi vilivyosanisishwa huingia kwenye sehemu za DNA zinazosaidiana;ilhali katika halijoto ifaayo ya kimeng'enya cha Taq (72℃), usanisi wa minyororo mipya ya DNA huanza kutoka mwanzo wa 3'mwisho kwa kutumia DNA ya ziada kama violezo na nyukleotidi moja kama nyenzo.Kwa hivyo baada ya kila mzunguko, mnyororo mmoja wa DNA unaweza kukuzwa katika minyororo miwili.Kurudia mchakato huu, kila mnyororo wa DNA uliounganishwa katika mzunguko mmoja unaweza kutumika kama kiolezo katika mzunguko unaofuata, na idadi ya minyororo ya DNA huongezeka maradufu katika kila mzunguko, ambayo ina maana kwamba utengenezaji wa PCR unakuzwa kwa kasi ya logi ya 2n.Baada ya mzunguko wa 25 hadi 30, uzalishaji wa PCR hutambuliwa kwa njia ya electrophoresis, na bidhaa maalum za DNA zinaweza kuzingatiwa chini ya mwanga wa UV (254nm).Kwa manufaa yake ya umaalum, unyeti, na urahisi, PCR imepitishwa katika uchunguzi wa kimatibabu wa maambukizo mengi ya virusi kama vile HCV, VVU, CMV, na HPV.Kwa vile PCR ni nyeti sana, inaweza kutambua DNA ya virusi katika kiwango cha fg, operesheni inapaswa kufanywa kwa uangalifu sana ili kuepuka chanya ya uongo.Kwa kuongezea, matokeo chanya katika mtihani wa asidi ya nuklei haimaanishi kuwa kuna virusi vya kuambukiza hai kwenye sampuli.
Kwa matumizi mapana ya mbinu ya PCR, mbinu na mbinu mpya hutengenezwa kulingana na mbinu ya PCR kwa madhumuni tofauti ya majaribio.Kwa mfano, kiasi cha muda halisi cha PCR kinaweza kutambua wingi wa virusi;in situ PCR hutumiwa kutambua maambukizi ya virusi katika tishu au seli;PCR iliyowekwa kwenye kiota inaweza kuongeza umaalumu wa PCR.Miongoni mwao, PCR ya kiasi cha muda halisi imetengenezwa kwa kasi zaidi.Mbinu nyingi mpya, kama vile uchunguzi wa hidrolisisi ya TaqMan, uchunguzi wa mseto, na uchunguzi wa kinara wa molekuli, zimeunganishwa katika mbinu ya muda halisi ya PCR, ambayo hutumiwa sana katika utafiti wa kimatibabu.Kando na kubainisha wingi wa virusi katika giligili ya mwili wa wagonjwa kwa usahihi, njia hii inaweza pia kutumiwa kugundua mutant inayostahimili dawa.Kwa hivyo, kiasi cha muda halisi cha PCR hutumika hasa katika tathmini ya athari ya tiba na ufuatiliaji wa ustahimilivu wa dawa.
C. Ugunduzi wa juu wa asidi ya nucleic ya virusi
Ili kukidhi mahitaji ya utambuzi wa haraka wa magonjwa mapya ya kuambukiza, mbinu mbalimbali za utambuzi wa matokeo ya juu, kama vile chips za DNA(DNA), zimeanzishwa.Kwa chip za DNA, vichunguzi mahususi huunganishwa na kuambatishwa kwenye chip ndogo za silikoni katika msongamano wa juu sana ili kuunda safu ndogo ya uchunguzi wa DNA (DNA) ambayo inaweza kuchanganywa kwa sampuli.Ishara ya mseto inaweza kuonyeshwa kwa darubini iliyounganishwa au skana ya leza na kuchakatwa zaidi na kompyuta na seti kubwa ya data kuhusu jeni tofauti inaweza kupatikana.Kuna aina mbili za DNA chip."Chip ya awali" ni kama ifuatavyo: oligonucleotides maalum huunganishwa moja kwa moja kwenye chips.Nyingine ni DNA pool chip.Jeni zilizoigwa au bidhaa za PCR zimechapishwa kwa mpangilio kwenye slaidi.Faida ya teknolojia ya chip ya DNA ni kugundua kwa wakati mmoja idadi kubwa ya mlolongo wa DNA.Toleo la hivi punde la chipu ya kugundua pathojeni inaweza kutambua zaidi ya virusi vya binadamu 1700 mara moja.Teknolojia ya chipu ya DNA ilitatua matatizo ya mbinu za mseto za jadi za nukleiki na ina matumizi mapana sana katika uchunguzi wa virusi na uchunguzi wa epidemiological.
Muda wa kutuma: Dec-23-2020